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Puro Pedigree® brinda un asesoramiento personalizado para alinear la oferta a las necesidades específicas de cada productor. El equipo comercial actúa como consultor genético del cliente, ayudándole a seleccionar la mejor combinación donante-toro según sus objetivos (raza, mejora genética deseada, características productivas, etc.), elaborando propuestas a medida.
Con la venta confirmada, se inicia la coordinación operativa para producir y entregar los embriones comprados. Puro Pedigree® actúa como enlace entre el cliente, el proveedor técnico In Vitro Uruguay, elaborando un plan de producción detallado.
Llegada la fecha acordada, se ejecuta la producción de embriones in vitro, mediante un equipo técnico para realizar la aspiración de ovocitos a la vaca donante y posteriormente fecundarlos en el laboratorio.
La fertilización in Vitro (F.I.V) es una biotecnología de la reproducción que permite multiplicar exponencialmente la cantidad de crías de animales de alto valor productivo. La diferencia fundamental con el MOET (Multiple Ovulation Embryo Transfer) es la posibilidad de colectar donantes sin la necesidad de estimulación hormonal previa, teniendo como ventajas:
- Mínimo manejo en el campo
- Colectas más frecuentes
- Vida útil de la donante
- Posibilidad de aspirar terneras
- Donantes preñadas hasta el 4to mes
- Donantes con edad avanzada y con problemas reproductivos adquiridos
Las etapas el Programa de Biotecnología Reproductiva F.I.V. son:
1- REVISIÓN Y SELECCIÓN DE DONANTES
La selección de las donantes es el primer paso para la implementación de un programa de producción y transferencia de embriones.
Además de la selección por mérito genético y productivo, es recomendable hacer un estudio de función ovárica a través de ecografía y las donantes que presenten un número muy bajo de folículos sean reemplazadas (en la medida del posible) por otras que tengan un mayor potencial de recuperación.
2- REVISIÓN, SELECCIÓN Y SINCRONIZACIÓN DE LAS RECEPTORAS
Previo al arranque del programa de sincronización las receptoras son seleccionadas desarrollo reproductivo, ciclicidad y condición corporal.
La sincronización se realiza desde un protocolo hormonal y tiene como objetivo empezar una nueva onda folicular para todas las hembras que presenten celo en el mismo día. Los animales que coinciden con el protocolo estarán habilitados para la transferencia de los embriones.
3- ASPIRACIÓN FOLICULAR Y RECOLECCION DE OVOCITOS
Donantes son aspiradas sin ninguna estimulación hormonal previa y en cualquier fase de ciclo estral.
Para donantes que van estar sometidas a un sistema de aspiración por un período prolongado de tiempo, nuestra recomendación es respetar un intervalo de 3 semanas entre cada sesión de aspiración. En ese sistema de aspiraciones cada 21 días se logran obtener ovocitos de mejor calidad y por lo tanto una producción embrionaria un poco superior.
En un día de aspiración se pueden aspirar 30-35 donantes.
4- FERTILIZACIÓN DE OVOCITOS
Los ovocitos recuperados de cada donante son madurados, fertilizados y cultivados en forma separada, manteniendo así la identidad de cada donante durante todo el proceso. Con una única pajuela de semen convencional se pueden inseminar ovocitos de 8-10 donantes, y en general una pajuela de semen sexado es suficiente para fertilizar ovocitos de hasta 6 donantes. En el caso especial de rodeos de leche, se pueden manejar las donantes en grupos, optimizando así el uso de cada pajuela de semen. Cuando manejamos las donantes en grupos llegamos a inseminar hasta 200 ovocitos usando una sola pajuela de semen sexado. De manera conservadora podríamos estimar que se podrían producir alrededor de 30 embriones con 1 sola pajuela.
5- CULTIVO IN VITRO
Luego de la fertilización in vitro (FIV) los embriones son cultivados por 7 días en incubadoras con temperatura y atmósfera controlada. Al final del período de cultivo, los embriones son seleccionados y envasados para transferencia en fresco. El excedente puede ser vitrificado para la formación de un banco de embriones al cliente, o directamente descartados.
6- TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN FRESCO
En esta etapa, se realiza una nueva evaluación de las receptoras sincronizadas y, se transfieren los embriones a aquellas receptoras que respondieron exitosamente al protocolo de sincronización.
7- CONGELACIÓN DE EMBRIONES FIV
Embriones producidos por fertilización in vitro (FIV) pueden ser congelados a través de dos técnicas:
A) Vitrificación: Por mucho tiempo la vitrificación fue el método estándar para la crio-preservación de embriones bovinos producidos por FIV. Antes de la vitrificación, los embriones pasan por una serie de medios de cultivo que protegerán sus estructuras celulares. Posteriormente se introducen los embriones (individualmente, o en grupos de hasta 5 embriones) en finísimas pajuelas de vitrificación perfectamente identificadas (comúnmente conocidas por OPS - del inglés Open Pulled Straw), antes de que sean rápidamente sumergidos en nitrógeno líquido a -196ºC y guardados en el banco de embriones.
La desvitrificación (proceso de recalentamiento de los embriones vitrificados) de estos embriones debe ser realizada en laboratorio, por personal técnico capacitado, y luego de un período corto de cultivo en incubadora, los mismos son seleccionados y envasados para transferencia a receptoras. Una vez desvitrificados, los embriones no pueden volver a ser congelados. La tasa de preñez esperada con embriones vitrificados está alrededor de los 35%-40%.
Ventajas de la Vitrificación:
Los embriones que sean vitrificados pueden ser cultivados con los mismos medios de cultivo embrionario que aquellos embriones que van a ser transferidos en fresco, es decir que la vitrificación es el método de elección para los casos que la cantidad de embriones exceda el número de receptoras y exista por parte del cliente el interés en hacer un banco de embriones para transferencias futuras.
Desventajas de la Vitrificación:
La vitrificación es una técnica que requiere desvitrificación en laboratorio por personal capacitado. No es posible realizar la misma a campo.
B) Congelación Lenta por DT (transferencia directa):
La congelación lenta es una técnica muy difundida entre los veterinarios que se dedican al lavado tradicional de embriones (MOET - Multiple Ovulation Embryo Transfer). La posibilidad de congelar embriones producidos por FIV de manera similar a los embriones producidos in-vivo es una novedad, y está disponible comercialmente hace poco tiempo.
Para que eso fuese posible, se desarrollaron nuevos medios para el cultivo embrionario y algunos componentes tradicionales de los medios “standard” fueron sustituidos por componentes similares más avanzados, específicos para que los embriones resistan exitosamente el proceso de congelación. La congelación de cada embrión se hace de manera individual, en pajuelas de 0.25 cc debidamente identificadas, respetando una curva de congelación lenta en congeladoras de embriones especialmente desarrolladas para tal. El proceso de congelación de una tanda de embriones lleva alrededor de 1 hora, y luego los embriones son transferidos a nitrógeno líquido a -196º C y guardados en el banco de embriones.
Las tasas de preñez esperada con embriones congelados por DT (transferencia directa), es similar a los índices obtenidos con embriones vitrificados y está alrededor de los 30%-35%.
Ventajas de la Congelación por DT:
La gran ventaja de esa técnica es la posibilidad de transferencia directa de los embriones a campo.
Desventajas de la Congelación por DT:
Para que los embriones puedan ser congelados de manera lenta (DT) existe la necesidad de cultivarlos en medios específicos para ese fin. Es decir que la decisión de que esos embriones sean congelados (y no transferidos en fresco y/o vitrificados) tiene que ser tomada al inicio del trabajo. Existe sí, la posibilidad de dedicar algunas donantes a congelación y otras a transferencia en fresco en una misma tanda de OPU.
8- TRANSFERENCIA DIRECTA DE LOS EMBRIONES
Las pajuelas pueden ser descongeladas a campo (10 segundos en el aire y 20 segundos sumergidos a 35º C) y directamente transferidas a receptoras previamente sincronizadas. Además de la facilitar inmensamente la transferencia, los embriones DT tienen gran potencial de comercialización entre criadores que buscan diversificar su genética. Otra gran ventaja es la posibilidad de mantener las donantes en un programa de aspiraciones periódicas durante todo el año y transferir los embriones en primavera, donde existe mayor disponibilidad de receptoras.
Aproximadamente 60 días después de la transferencia, se realiza el control de preñez para evaluar el resultado del procedimiento y hacer efectiva la garantía de preñez acordada, reforzando el compromiso de “genética con respaldo” asumido.
Finalmente, 9 meses después de la transferencia, los terneros nacen, concretándose el objetivo del proceso. Puro Pedigree® extiende su acompañamiento más allá de la venta, interesándose por el resultado final y brindando soporte adicional al cliente en esta etapa.